R&D Systems' RANKL 蛋白介绍

RANKL:

更正：R&D RANKL蛋白氨基酸长度为182个，不是之前所说245个。

别名：“肿瘤坏死因子配体超家族成员11”（tumor necrosis factor ligand superfamily member 11，TNFSF11）、“肿瘤坏死因子相关诱导细胞因子”（TNF-related activation-induced cytokine，TRANCE）、“蚀骨细胞抑制因子配体”（osteoprotegerin ligand，OPGL）或蚀骨细胞分化因子（osteoclast differentiation factor，ODF）。

结构：RANKL是肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor，TNF）超家族的一员，为破骨细胞抑制因子（osteoprotegerin）的配体，他是造骨细胞（osteoblast）膜上的一种膜蛋白，属于一种Ⅱ型跨膜蛋白。The human RANK Ligand cDNA encodes a type II transmembrane protein of 317 amino acids with a predicted cytoplasmic domain of 47 amino acids, a 21 amino acids transmembrane region, and an extracellular domain of 249 amino acids. 

作用机理：

A.      成骨细胞及骨髓基质细胞表达的RANKL与破骨细胞前体细胞或破骨细胞表面上的RANK结合，RANK膜内区有3个结合位点，与TNFR相关因子(TNF receptor associate factors, TRAFs)中的RAF1、2、3、5及6结合后，可激活转录因子NF-kB和蛋白激酶JNK，从而促进破骨细胞的分化及骨吸收活性。

B.       OPG（骨保护素）作为一种诱骗受体，可以竞争性的与RANKL结合，从而封闭RANKL与破骨细胞表面的RANK结合，抑制破骨细胞的分化成熟。

C.       RANKL/RANK与RANKL/OPG在生物体内保持着一定的比率,如果比率失衡,就会引起各种骨疾病。RANKL/RANK与RANKL/OPG系统将骨代谢、免疫系统和内分泌系统紧密的联系起来，为骨质疏松、类风湿关节炎、骨肿瘤及肿瘤的骨转移等骨破坏性疾病的治疗开辟了新的途径。

RANKL作用：

A.      可以增强成熟蚀骨细胞的活力，阻止破骨细胞凋亡，RANKL过表达，可导致一系列骨疾病，如风湿性关节炎，银屑病性关节炎。实验发现，将TNFSF基因剔除掉的老鼠，会导致严重的骨质石化症（Osteopetrosis），且会缺乏蚀骨细胞

B.       免疫上，RANKL被视为是树突细胞的存活因子。RANKL可阻止树突细胞凋亡，促进T淋巴细胞增殖，且在淋巴细胞的早期发育和淋巴结的器官发育中发挥决定性的作用，这些作用可被OPG阻断。这些都提示OPG/RANK/RANKL系统可能是联系骨代谢与免疫系统之间的桥梁。

C.      RANKL也可能具有调节细胞凋亡的功能。RANKL还可以透过与“SRC激酶”（SRC kinase），以及“肿瘤坏死因子受体相关因子6”（tumor necrosis factor receptor-associated factor 6，TRAF6）形成信息复合物，以致活AKT/PKB等细胞凋亡抑制激酶。

应用：

A.      骨代谢方面，如骨质疏松症，风湿性关节炎等相关。

B.       免疫相关

C.       癌症

RANKL蛋白因子使用方法：

在使用货号为390-TN-010的RANKL蛋白诱导细胞分化时，培养基中需同时加入抗His-tag标签抗体：Mouse Anti­polyHistidine Monoclonal Antibody (Catalog # MAB050)。只有此抗体存在时RANKL配体才能形成聚合体，进一步发挥功能

竞争分析：R&D VS PEPROTECH

R&D

Recombinant Human RANCE/TNFSF11/RANK L

Source:Mouse myeloma cell line, NS0-derived

Accession #:AAC51762

N-terminal Sequence Analysis:Met

Purity:>90%, by SDS-PAGE under reducing conditions and visualized by silver stain.

Predicted Molecular Mass:23 kDa

SDS-PAGE:35 kDa, reducing conditions

Activity:Measured by its ability to induce osteoclast differentiation of RAW 264.7 mouse monocyte/macrophage cells.The ED50 for this effect is typically 1.5­7.5 ng/mL in the presence of 2.5 µg/mL of a cross­linking antibody,

Protein Construct:

AA Sequence:182aa 

65 qhira ekamvdgswl dlakrsklea qpfahltina tdipsgshkv slsswyhdrg

      121 wgkisnmtfs ngklivnqdg fyylyanicf rhhetsgdla teylqlmvyv tktsikipss

      181 htlmkggstk ywsgnsefhf ysinvggffk lrsgeeisie vsnpslldpd qdatyfgafk

      241 vrdid

Peprotech

Catalog Number:  310-01price：2340

 20.0 kDa polypeptide comprising the TNF homologous region of RANKL (176 amino acid residues).

AA Sequence:  176aa

MEKAMVDGSW LDLAKRSKLE AQPFAHLTIN ATDIPSGSHK VSLSSWYHDR GWAKISNMTF SNGKLIVNQD GFYYLYANIC FRHHETSGDL ATEYLQLMVY VTKTSIKIPS SHTLMKGGST KYWSGNSEFH FYSINVGGFF KLRSGEEISI EVSNPSLLDP DQDATYFGAF KVRDID

Biological Activity:

Determined by its ability to induce NFkappaB in RAW264.7 cells in the absence of any cross-linking. The expected ED₅₀ for this effect is 10.0-25.0 ng/ml

R&D优势：

*RANKL与其受体RANK以六聚体的形式结合并将信号传递至NF-κB，若无His-Tag标签，RANKL不能聚合成聚合体的结构而发挥功能。

延伸：

许多激素和细胞因子参与调节RANKL的表达。IL-1、IL-17、1,25(OH)2D3、PTH、糖皮质激素和PGE2都可促进RANKL的表达，而TGF-B则抑制其表达。体外实验证实，RANKL和M-CSF可取代OB/ST诱导多能破骨祖细胞分化成熟。

Mouse Anti­polyHistidine Monoclonal Antibody (Catalog # MAB050)